RT-PCR技術服務的核心步驟包括:
RNA提取:從組織或細胞等樣本中提取RNA,確保RNA中無RNA酶和基因組DNA的污染。
反轉錄(RT):在反轉錄酶的作用下,以RNA為模板合成cDNA的第一鏈。這一步驟通常使用隨機引物、Oligo dT或基因特異性引物中的一種。
PCR擴增:以cDNA為模板,在DNA聚合酶的作用下進行PCR擴增,得到目的片段。
RT-PCR技術服務的注意事項:
避免RNA酶污染:RNA酶會降解RNA,影響實驗結果。因此,在操作過程中應使用RNA酶抑制劑,并確保所有器皿和試劑無RNA酶污染。
選擇合適的引物:引物的選擇對實驗結果至關重要。應根據實驗的具體情況選擇合適的引物,如隨機引物、Oligo dT或基因特異性引物。
控制反應條件:不同來源的逆轉錄酶反應溫度有所不同,應根據所選逆轉錄酶的要求設置合適的反應條件。
RT-PCR技術服務的應用:
基因表達研究:通過檢測細胞中特定基因mRNA的含量,可以評估該基因的表達水平。
病毒檢測:RT-PCR技術可用于檢測細胞中的RNA病毒,如SARS-CoV-2等。
基因克?。和ㄟ^RT-PCR技術可以直接克隆特定基因的cDNA序列,為后續的基因功能研究提供基礎
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