線粒體膜電位(MMP)檢測實驗原理
線粒體在產生能量時會將電化學勢能儲存于線粒體內膜,在內膜兩側,若質子及其他離子濃度的不對稱分布就會形成線粒體膜電位。
線粒體膜電位(MMP)檢測服務介紹
大量的研究表明線粒體與細胞凋亡密切相關,其中線粒體跨膜電位(MMP)的下降,被認為是細胞凋亡級聯反應過程中早發生的事件之一。它發生在細胞核凋亡特征(染色質濃縮、DNA斷裂)出現之前,一旦線粒體跨膜電位崩潰,則細胞凋亡不可逆轉。
實驗流程
1.細胞培養;
2.用適當的方法誘導細胞凋亡,同時設立陰性依照組合陽性對照組,收集細胞;
3.用PBS洗滌細胞三次,收集不多于1×106的細胞;
4.取100μL10×Incubation Buffer加900μL滅菌去離子水稀釋成1×Incubation Buffer,混勻并預熱至37℃;
5.吸取500μL 1×Incubation Buffer,加入1μL JC-1,渦旋混勻配成JC-1工作液;
6.取500μL JC-1工作液將細胞均勻懸浮,37℃,5% CO2的培養箱中孵育15~20min;
7.室溫離心(2000rpm,5min)收集細胞,用1×Incubation Buffer洗兩次;
8.吸取500 μL 10×Incubation Buffer重新懸浮細胞;
9.流式細胞儀檢測,分析。