油紅O染色是鑒定間充質干細胞向成脂細胞分化的一個重要指標。用特定的成脂誘導培養基(貨號:CTCC-JD003)培養一段時間后 ,間充質干細胞可分化為成脂細胞,并在細胞中形成脂滴。油紅O屬于偶氮染料,是很強的脂溶劑和染脂劑,與甘油三酯結合呈小脂滴狀。脂溶性染料能溶于細胞中的脂滴。當染料加入細胞中,染料則離開染液而溶于細胞內的脂滴中,使細胞內的脂滴星紅色或橘紅色。
油紅O工作液制備:
油紅染色液與染色稀釋液按照3:2的比例進行稀釋,混勻后室溫靜置10min,濾紙過濾;
移除孔內培養基,每孔加入2ml洗滌液1號靜置1min后移除,洗滌2次;
每孔加入2ml固定液,37°C (或室溫)固定30min ;
移除固定液。每孔加2ml洗滌液1號沖洗,洗滌2次;
每孔加入油紅O工作液2ml,37°C (或室溫)染色10-20min ;
每孔加入洗澡液3號2ml,快速移除,根據染色背景情況可重復1-2次;
每孔加洗滌液2號2ml,洗2次后顯微鏡下觀察。
實驗結果:脂滴呈橘紅色至鮮紅色,細胞核呈深藍色。